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T4 DNA連接酶 |
| CAS No.: |
9015-85-4 |
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中文名稱T4DNA連接酶中文同義詞T4連接酶;RNALIGASE,T4PAHGE,RECOMBINANT,SOLN.英文名稱T4DNALIGASE英文同義詞T4DNALIGASE;RNALIGASE,T4PAHGE;DNALIGASE;DNALIGASENAD-DEPENDENT;DNALIGASET4;DNALIGASE,THERMOSTABLE;EC6.5.1.1;EC6.5.1.2CAS號9015-85-4分子式分子量0EINECS號232-770-0相關類別生化試劑-酶類;DNA操作;DNA連接;核酸相關;試劑;氨基酸;生化試劑;化學試劑;分子生物試劑-核酸相關;分子生物學-克隆/點突變系列;EnzymeMol文件MolFile結構式T4DNA連接酶性質儲存條件?20°C形態(tài)緩沖甘油水溶液T4DNA連接酶用途與合成方法應用T4DNA連接酶即T4DNA連接酶，可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之間以磷酸二酯鍵結合，該催化反應需ATP作為輔助因子T4DNALigase即T4DNA連接酶，可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之間以磷酸二酯鍵結合，該催化反應需ATP作為輔助因子。概述T4DNA連接酶Chemicalbook用于體外DNA連接、連接檢測PCR，體內岡崎片斷連接成完整基因組DNA有重要作用。基因工程所用DNA連接酶由公司提供，最常用的是T4DNA連接酶（T4Lig）。連接機理與結構目前DNA連接反應機理是基于切口雙鏈DNA底物得到的：普遍認為連接反應由三步完成：①T4連接酶先由ATP供能產生E-AMP復合物；②E-AMP復合物識別雙鏈DNA切口位置，將AMP轉移到5’-P基團，形成5’-P-AMP復合物；③3’-OH親核攻擊5’-P-AMP形成磷酸二酯鍵，并釋放出AMP。連接酶分子大小T4連接酶由T4嗜菌體30基因合成，最早從T4嗜菌體感染的E。coli提取。后來發(fā)現(xiàn)DNA復制缺失型嗜菌體中連接酶產量更高，從而作為連接酶的主要來源，目前市場供應連接酶通過基因工程方法生產。Murry測定T4連接酶分子量為63000~68000Da，Armstrong進一步確定為55，230Da，由487個氨基酸（Aa）殘基組成，基因長度1464bp（GenBank序列號為X00039）。按照分子量與分子大小比例關系估算，T4連接酶大小約3。4nm，可跨越約1個DNA雙螺旋長度（即10bp）。連接酶占據(jù)連接端口下游（5’-P端部）7~10bp，占據(jù)端口上游（3’-OH端部）3~5bp。 |
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